食品平板菌落计数的办法_黑龙江福彩P62开奖结果
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食品平板菌落计数的办法

培育基和试剂

平板计数琼脂、75%乙醇、磷酸盐缓冲浓缩液

操纵顺序

2.1 样品制备

2.1.1以无菌操纵取有代表性的样品盛于灭菌容器内。若有包装,则用75%乙醇在包装启齿处擦拭后取样。

2.1.2制备样品匀液

以无菌操纵取25g样品,放入装有225ml浓缩剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1-2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质工夫超越2min,应在均质杯外加冰水冷却。

2.2 浓缩样品匀液

2.2.1用10ml灭菌吸管精确汲取1:10的样品匀液10ml,放入装有90ml浓缩剂的150ml 浓缩瓶中。敏捷振摇,将样品混匀,制成1:100的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次。沉着器中汲取样品匀液和当前的浓缩操纵中,吸管尖不要碰到瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端分开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。

2.3 平板接种

2.3.1关于每个样品,选用适宜的三个延续浓缩度的样品液停止平板计数。

2.3.2辨别用灭菌吸管汲取1ml样品液放入作了适合标记的平皿内。每个浓缩度的样品液用两个平皿。

2.3.3辨别加12-15ml平板计数琼脂(约45℃左右)到平皿内。立刻将平皿内的样品液和琼脂培育基充沛混淆。要避免把混淆物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1ml浓缩剂的另一灭菌平皿作空缺比较。将样品液参加平皿后应立刻倾注琼脂培育基,每个样品从开端浓缩到倾注最初一个平皿所用的工夫不得超越20min。

2.4 培育

待琼脂凝结后将平皿翻转,立刻放进36±1℃的恒温培育箱培育48±2h。培育箱应坚持肯定的湿度,经48h培育的琼脂培育基的失重不得超越15%。

2.5 菌落计数和记载

2.5.1培育后,立刻计数每个平板上的菌落数。25-250个菌落为适宜范畴。如不克不及立刻计数,应将平板寄存于0-4℃,但不得超越24h。

2.5.2操纵者对统一平板复核本人的计数后果,其差别应在5%之内,而其别人对这一平板反复计数,其差别应在10%这内。不然,应找出缘由,加以校正。

2.6 盘算和记载数字:适合浓缩度的两个平板的菌落数均匀值或两个浓缩度的平板菌落数均匀值乘以相应浓缩度倍数盘算出每克(毫升)样品中平板菌落数。

记载时,只要在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才干定下两位无效数字,第三位数字接纳四舍五入的办法记载。也可将样品的平板菌落数记载为10的指数方式。

后果陈诉

陈诉每克(毫升)样品中平板菌落数或估量的平板菌落数。


 

9.保管细菌的办法

1、细菌保管于穿刺培育物中:普通细菌保管于穿刺培育物可以维持两年。详细办法:用灭菌接种针挑取疏散精良的单菌落,针迟缓穿过琼脂抵达瓶底,延续频频,盖上瓶盖拧紧,做好标志。室温下寄存于暗处。(最好一点可以将瓶盖抓紧,在得当温度下培育留宿,再拧紧瓶盖并加封Parafilm膜,室温或最幸亏4度避光保管)。
2、细菌保管于含有甘油的培育物中:
(1)在液体培育基中生长的细菌培育物:取0.85ml细菌培育物,参加0.15ml高压灭菌甘油,振荡培育物使甘油散布平均,然后转移到标志好的保管管内,密封,在乙醇-干冰或液氮中解冻后再转至-70度临时保管。在苏醒时,用灭菌接种针刮取解冻的培育物外表,然后立刻把黏附于接种针上的细菌划于含得当抗生素的LB琼脂平板外表,于37渡过夜。
(2)在琼脂平板上生长的细菌培育物:从琼脂平板外表刮下细菌放入装有2mlLB的无菌试管内,再参加等量的含有30%灭菌甘油的LB培育基,振荡使甘油完全散布平均后,分装于无菌保管管内,密封,再按前述办法冰冻保管。这一办法的长处在于可用于保管在质粒载体上树立的cDNA文库。 
    
假如甘油与培育基混淆后冻存在普通冰箱的冰冻室里,不克不及重复苏醒运用,并且假如甘油含量太低,解冻成冰块,苏醒结果欠安。普通都运用甘油终浓度为30%。