菌落总数的查验办法_黑龙江福彩P62开奖结果
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菌落总数的查验办法

一、菌落总数引见:

  菌落是指细菌在固体培育基上生长繁衍而构成的能被肉眼辨认的生长物,它是由恒河沙数相反的细菌聚集而成。当样品被浓缩到肯定水平,与培育基混淆,在肯定培育条件下,每个可以生长繁衍的细菌细胞都可以在平板上构成一个可见的菌落。

  菌落总数便是指在肯定条件下(如需氧状况、养分条件、pH、培育温度和工夫等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国度规范办法规则,即在需氧状况下,37℃培育48h,能在平凡养分琼脂平板上生长的细菌菌落总数,以是厌氧或微需氧菌、有特别养分要求的以及非嗜中温的细菌,由于现有条件不克不及满意其生理需求,故难以繁衍生长。因而菌落总数并不表现实践中的一切细菌总数,菌落总数并不克不及区分此中细菌的品种,以是偶然被称为杂菌数,需氧菌数等。

  菌落总数测定是用来断定食品被细菌净化的水平及卫生质量,它反应食品在消费进程中能否契合卫生要求,以便对被检样品做出得当的卫生学评价。菌落总数的几多在肯定水平上标记着食品卫生质量的优劣。 

二、查验办法

  菌落总数的测定,普通将被检样品制成几个差别的10倍递增浓缩液,然后从每个浓缩液中辨别取出1mL置于灭菌平皿中与养分琼脂培育基混淆,在肯定温度下,培育肯定工夫后(普通为48小时),记载每个平皿中构成的菌落数目,根据浓缩倍数,盘算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。

  根本操纵普通包罗:样品的浓缩--倾注平皿--培育48小时--计数陈诉。

  国际外菌落总数测定办法根本分歧,从检样处置、浓缩、倾注平皿到计数陈诉无何分明差别,只是在某些详细要求方面稍有差异,若有的国度在样品浓缩和倾注培育进,对吸管内液体的流速,浓缩液的振荡幅度、工夫和次数以及安排工夫等均作了比拟详细的规则。

 三、阐明

(一)样品的处置和浓缩:

  1.操纵办法:以无菌操纵取检样25g(或25ml),放于225mL灭菌生理盐水或其他浓缩液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置得当数目的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充沛振要或研磨制成110的平均浓缩液。

  固体检样在参加浓缩液后,最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速率处置1min,制成110的平均浓缩液。

  用1ml灭菌吸管汲取110浓缩液1ml,沿管壁冉冉注入含有9ml灭菌生理盐水或其他浓缩液的试管内,振摇试管混淆平均,制成1100的浓缩液。

  另取1ml灭菌吸管,按上项操纵次序,制10倍递增浓缩液,云云每递增浓缩一次即换用11ml灭菌吸管。

  2.无菌操纵:操纵中必需有无菌操纵的观点,所用玻璃器皿必需是完全灭菌的,不得残留有细菌或抑菌物质。所用铰剪、镊子等用具也必需停止消毒处置。样品假如有包装,使用75%乙醇在包装启齿处擦拭后取样。

  操纵该当在超净任务台或颠末消毒处置的无菌室停止。琼脂平板在任务台表露15分钟,每个平板不得超越15个菌落。

  3.采样的代表性:如系固体样品,取样时不该会合一点,宜多采几个部位。固体样品必需颠末均质或研磨,液体样品须颠末振摇,以取得平均浓缩液。

  4.样品浓缩偏差:为增加样品浓缩偏差,在延续顺序浓缩时,每一浓缩液应充沛振摇,使其平均,同时每一浓缩度应改换一支吸管。

  在停止延续浓缩时,应将吸管内液体沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入浓缩液内,以免吸管内部粘附的检液溶于其内。

  为增加浓缩偏差,SN规范接纳取10mL浓缩液,注入90mL缓冲液中。

  5.浓缩液:样品浓缩液次要是灭菌生理盐水,有的接纳磷酸盐缓冲液(或0.1%卵白胨水),后者对食品已受毁伤的细菌细胞有肯定的维护作用。如对含盐量较高的食品(如酱油)停止浓缩,可以接纳灭菌蒸馏水。

(二)倾注培育

  1.操纵办法:依据规范要求或对净化状况的估量,选择2~3个适合浓缩度,辨别在制10倍递增浓缩的同时,以汲取该浓缩度的吸管移取1ml浓缩液于灭菌平皿中,每个浓缩度做两个平皿。

  将凉至46℃养分琼脂培育基注入平皿约15ml,并转动平皿,混淆平均。同时将养分琼脂培育基倾入加有1ml浓缩液(不含样品)的灭菌平皿内作空缺比较。

  待琼脂凝结后,翻转平板,置36±1℃温箱内培育48±2h,取出盘算平板内菌落数量,乘以浓缩倍数,即得每克(每毫升)样品所含菌落总数。

  2.倾注用培育基应在46℃水浴内保温,温渡过高会影响细菌生长,过低琼脂易于凝因此不克不及与菌液充沛混匀。如无水浴,应以皮肤感觉较热而不烫为宜。

  倾注培育基的量规则纷歧,从12~20ml不等,普通以15ml较为适合,平板过厚可影响察看,太薄又易于干裂。倾注时,培基底部若有沉淀物,应将底部弃去,以免与菌落混杂而影响计数察看。

  3.为使菌落能在平板上平均散布,检液参加平皿后,应尽快倾注培育基并旋转混匀,可正反两个偏向旋转,检样从开端浓缩到倾注最初一个平皿所用工夫不宜超越20min,以避免细菌有所殒命或繁衍。。

  4.培育温度普通为37℃(水产品的培育温度,由于其生存情况水温较低,故多接纳30℃)。培育工夫普通为48h,有些办法只需求24h的培育即可计数。培育箱应坚持肯定的湿度,琼脂平板培育48h后,培育基失重不该超越15%。

  5.为了防止食品中的巨大颗粒或培基中的杂质与细菌菌出家生混杂,不易辨别,可同时作一浓缩液与琼脂培基混淆的平板,不经培育,而于4℃情况中安排,以便计数时尴尬刁难照察看。

  在某些场所,为了避免食品颗粒与菌落混杂不清,可在养分琼脂中参加氯化三苯四氮唑(TTC),培育后菌落呈白色,易于辨别。

(三)计数和陈诉

  1.操纵办法:培育到工夫后,计数每个平板上的菌落数。可用肉眼察看,须要时用缩小镜反省,以防脱漏。在记下各平板的菌落总数后,求出同浓缩度的各平板均匀菌落数,盘算处原始样品中每克(或每ml)中的菌落数,停止陈诉。

  2.抵达规则培育工夫,应立刻计数。假如不克不及立刻计数,应将平板安排于04℃,但不得超越24h

  3.计数时应选取菌落数在30~300之间的平板(SN规范要求为25~250个菌落),如有二个浓缩度均在30~300之间时,按国度规范办法要求应以二者比值决议,比值小于或即是2取均匀数,比值大于2则其较小数字(有的规则不思索其比值巨细,均以均匀数陈诉)。

  4.若一切浓缩度均不在计数区间。如均大于300,则取最高浓缩度的均匀菌落数乘以浓缩倍数陈诉之。如均小于30,则以最低浓缩度的均匀菌落数乘浓缩倍数陈诉之。如菌落数有的大于300,有的又小于30,但均不在30~300之间,则应以最靠近30030的均匀菌落数乘以浓缩倍数陈诉之。如一切浓缩度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低浓缩倍数陈诉之。有的规则对上述几种状况盘算出的菌落数按预算值陈诉。

  5.差别浓缩度的菌落数应与浓缩倍数成正比(统一浓缩度的二个平板的菌落数应根本靠近),即浓缩倍数愈高菌落数愈少,浓缩倍数愈低菌落数愈多。如呈现逆反景象,则应视为查验中的过失(有的食品偶然能够呈现逆反景象,如酸性饮料等),不该作为检样计数陈诉的根据。

  6.当平板上有链状菌落生永劫,如呈链状生长的菌落之间无任何分明界线,则应作为一个菌落计,如存在有几条差别泉源的链,则每条链均应按一个菌落盘算,不要把链上生长的每一个菌落离开计数。若有片状菌落生长,该平板普通不宜接纳,如片状菌落不到平板一半,而另一半又散布平均,则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。

  7.当计数平板内的菌落数过多(即一切浓缩度均大于300时),但散布很平均,可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应浓缩倍数作为该平板的菌落数。

  8.菌落数的陈诉,按国度规范办法规则菌落数在1~100时,按实无数字陈诉,如大于100时,则陈诉后面两位无效数字,第三位数按四舍五入盘算。固体检样以克(g)为单元陈诉,液体检样以毫升(ml)为单元陈诉,外表涂擦则以平方厘米(cm2)陈诉。