大肠菌群及查验办法_黑龙江福彩P62开奖结果
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大肠菌群及查验办法

一、大肠菌群引见

  大肠菌群并非细菌学分类定名,而是卫生细菌范畴的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便净化有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全分歧,其界说为:需氧及兼性厌氧、在37℃能剖析乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。普通以为该菌群细菌可包罗大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阳沟肠杆菌等。

  大肠菌群散布较广,在温血植物粪便和天然界普遍存在。观察研讨标明,大肠菌群细菌多存在于温血植物粪便、人类常常运动的场合以及有粪便净化的中央,人、畜粪便对外界情况的净化是大肠菌群在天然界存在的次要缘由。粪便中多以典范大肠杆菌为主,而外界情况中则以大肠菌群其他型别较多。

  大肠菌群是作为粪便净化目标菌提出来的,次要因此该菌群的检出状况来表现食品中有否粪便净化。大肠菌群数的上下,标明了粪便净化的水平,也反应了对人体安康危害性的巨细。粪即是人类肠道分泌物,此中有安康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,以是粪便内除普通正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在(如梵衲氏菌、志贺氏菌等),因此食品中有粪便净化,则可以揣测该食品中存在着肠道致病菌净化的能够性,埋伏着食品中毒和盛行病的要挟,必需看尴尬刁难人体安康具有潜伏的风险性。

  大肠菌群是评价食品卫生质量的紧张目标之一,现在已被国际外普遍使用于食品卫生任务中。

二、大肠菌群查验办法:

  由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便净化有关的细菌,即:需氧及兼性厌氧、在37℃能剖析乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因而大肠菌群的检测普通都是依照它的界说停止。

  现在国际接纳的收支口食品大肠菌群检测办法次要有国度规范和原国度商检局制定的行业规范。两个规范办法在检测顺序上略有差别。

(一)国度规范:国度规范接纳三步法,即:乳糖发酵实验、别离培育和证明实验。

  乳糖发酵实验:样品浓缩后,选择三个浓缩度,每个浓缩度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培育48±2h,察看能否产气。

  别离培育:将产气发酵管培育物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培育18-24h,察看菌落形状。

  证明实验:挑取平板上的可疑菌落,停止革兰氏染色察看。同时接种乳糖发酵管36±1℃培育24±2h,察看产气状况。

  陈诉:依据证明为大肠杆菌阳性的管数,查MPN表,陈诉每100ml(g)大肠菌群的MPN值。

  详细操纵拜见GB4789.3-94 《中华人民共和国国度规范食品卫生微生物学查验 大肠菌群测定》

(二)原国度商检局制定的行业规范,等效接纳美国FDA的规范办法,用于对出口食品中的大肠杆菌停止检测。本办法接纳两步法:

  揣测实验:样品浓缩后,选择三个浓缩度,每个浓缩度接种三管LST肉汤。36±1℃培育48±2h,察看能否产气。

  证明实验:将产气管培育物接种煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中,36±1℃培育48±2h,察看能否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表,陈诉每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。

  详细操纵拜见SN0169-92 《中华人民共和国收支口商品查验行业规范出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌查验办法》

三、阐明:

1MPN检索表:

  MPN 为最大能够数(Most Probable Number)的简称。这种办法,对样品停止延续系列停止浓缩,参加培育基停止培育,从规则的反响呈阳性管数的呈现率,用概率论来推算样品中菌数近来似的数值。

  MPN检索表只给了三个浓缩度,如改用差别的浓缩度,则表内数字应相应低落或添加10倍。留意国度规范和行业规范中所附MPN表所用浓缩度是差别的,并且后果陈诉单元也不相反。

2.初发酵和证明实验:

  无论是国度规范的三步法照旧行业规范的两步法,都应用了乳糖发酵管停止了两次发酵实验,培育基的配制略有差别,但都是为了证明培育物能否契合大肠菌群的界说,即“在37℃剖析乳糖产酸产气”

  初发酵阳性管,不克不及一定便是大肠菌群细菌,颠末证明实验后,偶然能够成为阴性。无数据标明,食品中大肠菌群查验步调的契合率,初发酵与证明实验相差较大。因而,在实践检测任务中,证明实验是必须的。

3.产宇量与倒管:

  在乳糖发酵实验任务中,常常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(偶然比小米粒还小),偶然可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有慢慢上浮的吝啬泡。实行标明,大肠菌群的产宇量,多者可以使发酵倒管全部充溢气体,少者可以发生比小米粒还小的气泡。假如对产酸但未产气的乳糖发酵若有疑问时,可以用手重轻感动试管,若有气泡沿管壁上浮,即应思索能够有气体发生,而应作进一步实验。

4.挑选菌落:

  国度规范中,需求对初发酵阳性培育物接种伊红美蓝平板别离,对典范和可疑菌落停止察看和证明实验。由于大肠菌群是一群细菌的总称,在平板大肠菌群菌落的光彩、形状等方面较大肠菌更为庞大和多样,并且与大肠菌群的检出率亲密相干。国度规范办法规则伊红美蓝平板为别离培育基,在该平板上,大肠菌群菌落呈黑紫色有光芒或无光芒时,检出率最高;白色、粉白色菌落检出率较低。

  别的,挑取菌落数与大肠菌群的检出率有亲密干系,只挑取一个菌落,由于机率题目,尤其当菌落不典范时,很难防止假阴性的呈现。以是挑菌落肯定要挑取典范菌落,如无典范菌落则应多挑几个,以免呈现假阴性。

5.抑菌剂:

  大肠菌群查验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂的次要作用是克制别的杂菌,特殊是革兰氏阳性菌的生长。

  国度规范中乳糖胆盐发酵管应用胆盐作为抑菌剂,行业规范中LST肉汤应用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂,BGLB肉汤应用煌绿和胆盐作为抑菌剂。

  抑菌剂虽可克制样品中的一些杂菌,而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选,但对大肠菌群中的某些菌株偶然也发生一些克制作用。有些抑菌剂用量甚微,称量时稍有偏差,即可对抑菌作用发生影响,因而抑菌剂的添加应严厉依照规范办法停止。