志贺氏菌属及查验办法_黑龙江福彩P62开奖结果
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志贺氏菌属及查验办法

  志贺氏菌属(Shigella) 的细菌(通称痢疾杆菌),是细菌性痢疾的病原菌。临床上能惹起痢疾症状的病原生物许多,有志贺氏菌、梵衲氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等,另有阿米巴原虫、鞭毛虫、以及病毒等均可惹起人类痢疾,此中以志贺氏菌惹起的细菌性痢疾最为罕见。人类对痢疾杆菌有很高的易理性。在幼儿可惹起急性中毒性菌痢,殒命率甚高。

一、生物学性状

  志贺氏菌属细菌的形状与普通肠道杆菌无分明区别,为革兰氏阴性杆菌,长约2-3μ m ,宽0.5-0.7μ m 。不构成芽胞,无荚膜,无鞭毛,有菌毛。DNA的G+C为49-53克分子%(Tm法)。

  需氧或兼性厌氧。养分要求不高,能在平凡培育基上生长,最适温度为37℃,最适pH为6.4-7.8。37℃培育18-24小时后菌落呈圆形、微凸、润滑潮湿、无色、半通明、边沿划一,直径约2nm,宋内氏菌菌落普通较大,较不通明,并常呈现扁平的粗糙型菌落。在液体培育基中呈平均混浊生长,无菌膜构成。

  本菌属都能剖析葡萄糖,产酸不产气。大多不发酵乳糖,仅宋内氏菌缓慢发酵乳糖。靛基质发生不定,甲基红阳性,VP实验阴性,不剖析尿素,不发生H2S。依据生化反响可停止开端分类。

  志贺氏菌属的细菌对甘露醇剖析才能差别,可分为二大组。

  A、不剖析甘露醇组:次要为志贺氏菌。又依据可否发生靛基质,进一步分靛基质阳性(1、3、4、5、6、9、10型)和靛基质阴性(2、7、8型)的志贺氏痢疾菌。

  B、剖析甘露醇组:包罗福氏、鲍氏、宋内氏菌。再按乳糖剖析状况,分为缓慢剖析乳糖的宋内氏和不剖析乳糖的福氏和鲍氏菌。后者进一步再依据靛基质发生与否,分靛基质阳性(福氏菌1、2、3、4、5型和鲍氏菌5、7、9、11、13、15型)和靛基质阴性(福氏菌6型和鲍氏菌1、2、3、4、6、8、10、12、14)二类  抗原结构与分型:志贺氏菌属细菌的抗原构造由菌体抗原(O)及外表抗原(K)构成。次要抗原有三种。

  型特异性抗原:型多糖抗原为菌体抗原的一种,是润滑型菌株所含有的紧张抗原。当菌株变为粗糙型时,此抗原也常随之消逝,各菌型所含的型抗原差别,可用于区别菌种的型别。

  群特异性抗原:为润滑型菌株的主要抗原,也是菌体抗原的一种。特异性较低,常在数种类似的菌内呈现。在福氏菌株中,由于所含群抗原差别,可将某些菌型分为多种亚型,如福氏菌2型,依据群抗原差别,可分红2a、2b两个亚型。

  外表抗原(K抗原):在新别离的某些菌株菌体外表含有此种抗原。不耐热,加热100℃1小时即被毁坏。具有此种抗原的菌株,可制止菌体抗原与相应免疫血清发作凝聚。

  依据抗原结构的差别,按最新国际分类法,将本属细菌分为四个群、39个血清型(包罗亚型)(见表二)

表二 志贺氏菌属抗原的分类

 

菌 名

血 清 分 类

生 化 特 性

亚 型

甘露醇

鸟氨酸脱羧酶

志贺氏菌

A

1~10

 

+

-

福 氏 菌

B

1~6

x、y变种

1a、1b、2a、2b、3a、3b

3c、4a、4b

+

-

鲍 氏 菌

C

1~15

 

+

-

宋内氏菌

D

1

 

+

-

 

 

  A群:也称志贺氏菌群,有10个血清型。不发酵甘露醇,无鸟氨酸脱羧酶,与其他各群细菌无血清学联络。

  B群:也称福氏菌群,已有13个血清型(包罗亚型和变种)。近来又发明3个亚型(1c、4c、5b)。发酵甘露醇,无鸟氨酸脱羧酶。抗原构造较庞大,各型间有穿插凝聚。每一福氏菌型具有二种抗原,即型特异性抗原和群抗原,前者只存在于同型菌株中,后者有很多种,存在于福氏各菌型中。比方福氏1b型除含有1型特异性抗原外,尚含有4、6群抗原。

  C群:也称鲍氏菌群,有15个血清型,剖析甘露醇,无鸟氨酸脱羧酶。各型内无穿插凝聚。

  D群:也称宋内氏菌群,仅有一个血清型。剖析甘露醇,有鸟氨酸脱羧酶,缓慢发酵乳糖。有Ⅰ、Ⅱ相之分。

  抵挡力:志贺氏菌属在外界情况中的生活力,以宋内氏最强,福氏菌次之,志贺氏菌最弱。普通在湿润泥土中能存活34天,37℃水中存活20天,在冰块中可存活96天,在粪便内(室温)存活11天。日光间接照射30分钟,56-60℃10分即被杀去世,对低温和化学消毒剂很敏感,1%石炭酸中15-30分钟即被杀去世,对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感,但易发生耐药性。

  变异性:

  S-R型变异:菌落可由润滑型变为粗糙型,同时常伴有生化反响、抗原结构和致病性的变异。在机体内,尤其在慢性患者和规复期患者,志贺氏菌可发作变异而得到原来的生化和抗原特性,成为不典范菌株。但此中局部不典范菌株,可经过10%胆汁肉汤等返祖为典范菌株。故在慢性患者或带菌者粪便反省时,对这类菌株要特殊留意,必需屡次重复反省。因这对感染源的发明及控制有紧张意义。

  耐药性变异:自从普遍运用抗菌素以来,志贺氏菌的耐药菌株不时添加,给防治任务带来很多困难。国际局部地域报道(1972-1974),志贺氏菌对四环素的耐药率达74%、氯霉素73.6-97%、链霉素84-98%、合霉素75-100%、磺胺类97-100%,可见国际对常用几种抗菌素的耐药率相称高。

  毒力变异与其他变异:1963年南斯拉夫Mel氏起首创用依赖链霉素的志贺氏菌株(依链Sd株,口服防备痢疾。Sd株是一株必需有链霉素存在下才干生长的菌株,其毒力削弱但仍坚持免疫原性。美国以自然变异无毒株与大肠杆菌杂交而取得的MH株制成疫苗,其免疫结果和波动性均较Sd株差。我国正直力应用变异办法经过植物和药物处置等寻觅平安无效可供口服的痢疾杆菌活菌苗,并已获得开端结果。

  与E.coli的辨别:志贺氏菌与E.coli的区别,确实是很困难的,这也反应了这二者在DNA_DNA杂交表现亲密相干性,本质是“统一种”。A.培育物经常是不活动的,赖氨酸是阴性。B.除了福氏志贺氏6、鲍氏志贺氏13和14、痢疾志贺氏3多数菌株外,在糖发酵时不产气。C.发酵粘液酸或乙酸盐洋菜上或Chiristensen柠檬酸洋菜 。如呈碱反响的菌株则相似与E.coli。D.鲍氏志贺氏菌和痢疾志贺氏菌在美国很少见。

二、盛行病学 :

  人和灵长类是志贺氏菌的适合宿主,养分不良的幼儿、老人及免疫缺陷者更为易感。据报道,每年约有14000例志贺氏菌病,但估量发病人数为30万。

  据FDA统计,1997年美国加州等5个州食源性疾病共为8051例,此中志贺氏菌惹起的为1263例。

  志贺氏菌病常为食品迸发型或经水传达。和志贺氏菌病相干的食品包罗色拉(土豆、金枪鱼、虾、通心粉、鸡),生的蔬菜,奶和奶成品,禽,水果,面包成品,汉堡包,和有鳍鱼类。志贺氏菌在拥堵和不卫生条件下能敏捷传达,常常发明于职员少量会合的中央如餐厅、食堂。食源性志贺氏菌盛行的最次要缘由是从事食品加工行业职员患菌痢或带菌者净化食品,食品打仗职员团体卫生差,寄存已净化的食品温度不得当等。

三、致病性:

  志贺氏菌惹起的细菌性痢疾,次要经过消化道途径传达。依据宿主的安康情况和年事,只需大批病菌(至多为10个细胞)进入,就有能够致病。

  致病要素:志贺氏菌的致病作用,次要是侵袭力、菌体内毒素一般菌株能发生外毒素。

  侵袭力:志贺氏菌进入大肠后,由于菌毛的作用粘附于大肠粘膜的上皮细胞上,继而进入上皮细胞并在内繁衍,分散至临近细胞及上皮上层。由于毒素的作用,上皮细胞殒命,粘膜下发炎,并有毛细吸管血栓构成以致坏去世、零落,构成溃疡。志贺氏菌普通不进犯其他构造,偶然可惹起败血症。现在以为不管是发生外毒素的照旧只要内毒素的志贺氏菌,必需侵入肠壁才干致病。因而,对粘膜构造的侵袭力是决议致病力的次要要素。

  内毒素:志贺氏菌属中各菌株都有激烈的内毒素,作用于肠壁,使通透性增高,从而促进毒素的吸取。继而作用于中枢神经零碎及心血管零碎,惹起临床上一系列毒血症症状,如发热、神态妨碍,乃至中毒性休克。毒素毁坏粘膜,构成炎症、溃疡,出现典范的痢疾脓血便。毒素作用于肠壁动物神经,使肠道功用混乱,肠蠕动共济失谐和痉挛,尤其直肠括约肌最分明,因此发作腹痛、里急后重等症状。

  外毒素:志贺氏菌1型及局部2型(斯密兹痢疾杆菌)菌株能发生激烈的外毒素。为卵白质,不耐热,75-80℃1小时即可毁坏。其作用是使肠粘膜通透性添加,并招致血管内皮细胞侵害。外毒素经甲醛或紫外线处置可脱毒成类毒素,能安慰机体发生相应的抗毒素。普通以为具有外毒素的志贺氏菌惹起的痢疾比拟严峻。

  所致疾病:志贺氏菌惹起的细菌性痢疾可分为两类6型。

  A、急性细菌性痢疾:又分急性典范、急性非典范、急性中毒性菌痢三型。急性典范菌痢症状典范,有腹痛腹泻、脓血粘便、里急后重、发热等症状。各型菌都可惹起,以志贺氏菌惹起的较重,宋内氏菌惹起的较轻。经医治,预后精良。如医治不彻底,可转为慢性。急性非典范菌痢症状不典范,易诊断错误延误医治,常招致带菌或慢性开展。急性中毒性菌痢小儿多见,各型菌都可发作。中毒性菌痢一系列的病理生理变革,次要是内毒素形成机体微循环妨碍的后果。招致内脏淤血、四周循环衰竭(休克),次要功用器官贯注缺乏,发作心力弱竭、脑水肿,急性肾功用衰竭。严峻微循环妨碍,再加上内毒素毁伤血管内皮细胞、激活凝血因子等,而发作洋溢性血管内凝血(DIC)。

  B、慢性细菌性痢疾:又分慢性拖延型、慢性隐伏型、急性发作型三型。慢性拖延型,通常由急性菌痢医治不彻底等惹起。病程超越2个月,时愈时发,大便培育阳性率低。在有临床症状时为急性发作型,该型每每在半年内有急性菌痢病史。慢性隐伏型菌痢,是在一年内有过菌痢病史,临床症状早已消逝,但直肠镜可发明病变或大便培育阳性。

  志贺氏菌带菌者有三品种型。A.安康带菌者,是指临床上无肠道症状而又能排挤痢疾杆菌者。这种带菌者是次要感染源,特殊是饮食业、膳食员、和保育员中的带菌者,潜伏的风险性更大。B.规复期带菌者,是指临床症状已治愈的病人,仍持续排菌达2周之久者。C.慢性带菌者,是指临床症状已治愈,但临时排菌者。

  免疫性:病后有肯定的免疫力,但免疫期短,也不波动。能够因本菌属菌型浩繁,互相间无穿插免疫性之故。免疫性与血中抗体好像有关,而与肠道粘膜细胞吞噬才能增强和机体对痢疾杆菌内毒素耐受性进步有关。肠道排泄型抗体即粪抗体亦有肯定作用。粪抗体呈现早、消逝快,在脓血粘便中,粪抗体检出率高达90%。这为志贺氏疫苗经口免疫的能够性,提供了实际根据。

四、查验和控制:

(1-3见附录)

  4.增菌培育:

  宋内氏志贺氏菌的增菌培育;以无菌的手续称取样品25g放入事前加有0.5μg/mL重生霉素的250mL志贺氏菌肉汤中,将此混悬液于室温中静置10min并时时振摇之。将浸液倾入灭菌的500mL锥形瓶中,调解pH,须要时用1N NaOH或1NHCL调至pH7.2±0.2,再将此锥形瓶置于加有新颖催化剂的厌氧缸中,放入GasPak并加水使之活化。因而厌氧罐外部温度较高,每次用后皆应将催化剂加热。将厌氧罐置于44.0℃水浴中培育20h,振摇混悬液后划线接种于麦康凯氏琼脂平板。于35℃培育20h。

  对其他志贺氏菌的增菌培育亦按上述办法停止。但参加重生霉素量为3μg/mL,并在厌氧情况下置42.0℃水浴培育。

  5.志贺氏菌的别离

  a.惯例培育办法

  反省麦康凯琼脂平板,志贺氏菌的菌落为浅粉白色,半通明,将此可疑菌落接种于下列培育基中:葡萄糖肉汤,TSI琼脂斜面,赖氨酸脱羧酶肉汤,动力实验琼脂和胰胨。置35℃培育48h,但应在20h停止反省,弃去一切有动力、产H2S、产气、赖氨酸脱羧以及发酵蔗糖与乳糖的培育物。关于发生吲哚者,应弃去其44℃增菌物中的阳性培育物。至于42℃增菌培育中的一切可疑培育物皆有能够是阳性或是阴性,因而皆应予保存。

  b.生理学性状

  将初筛反响精良的培育物再接种其他生化实验,志贺氏菌的特性概述如下别离:H2S、尿素酶、葡萄糖、(产气)活动、赖氨酸、脱羧酶、蔗糖、侧金盏花醇、乳糖(2日)、KCN、丙二酸盐、柠檬酸盐、与水杨素皆为阴性;甲基红为阳性。用抗血清判定其血清型或参照表二所列32个血清型的生物学特性停止实验。其粘液酸盐(mucate)和乙酸盐(acetate)的反响是会有所协助的。在这些反响中志贺氏菌普通为阴性,而不产气的大肠杆菌普通至多在此反响中的一项为阳性。

  c.血清学性状:

  将犊牛肉浸汁琼脂斜面的24h培育物混悬于3mL0.85%生理盐水中,使其浓度相称于 规范比浊管第5号,在干净的玻璃平皿上用蜡笔标志9个3x1cm的方块.依照以下方案滴加混悬液,抗血清与生理盐水。 

  用接种针搅匀每个方块中的内容物,留意不要使方块之间相互杂乱。坚定平皿3-4min以促进其凝聚作用。并按以下记着其凝聚反响的水平:0=无凝聚反响,1+=委曲可发觉的凝聚反响,2+=呈50%明澈的凝聚反响,3+=呈75%明澈的凝聚反响,4+=有可见的絮片状的凝聚反响,混悬液完全清晰明澈通明。再以出现分明阳性(2+、3+、4+)的多价血清所属的单价血清重新反省其混悬液,如呈阴性反响,则将混悬液置蒸锅中加热30min以水解能起搅扰作用的荚膜抗原。此时如与反响单价血清呈阳性,则再以多价血清反省。由于这些系揣测的血清型,故一切能够与所用血清呈阴性反响。

  防备控制志贺氏菌盛行最好的步伐是精良团体卫生和安康教诲,水源和污水的卫生处置能避免水源性志贺氏菌的迸发。

  对可疑的食品,包罗在食用前用手处置过或经细微加热的食品、植物源性食品或消耗者间接入口的产品,且其酸度范畴在pH5.5-6.5之间。普通来说,当食品中含有大肠菌群、大肠杆菌和梵衲氏菌时,含有志贺氏菌的能够性极大。

  菌痢的防治除对急性菌痢、慢性菌痢和种种带菌者停止“三早”步伐(晚期诊断、晚期断绝和晚期医治)以清除感染源外,应接纳以堵截感染途径为主的综合性步伐。展开爱国卫生活动,抓好食品加工饮食效劳行业的办理,对从事食品加工职员应活期作带菌者反省。